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評(píng)價(jià)一個(gè)無菌工藝的操作能力最有用的方法是工藝模擬試驗(yàn)，及培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)。過往對(duì)培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)僅僅關(guān)注無菌灌裝階段，沒有對(duì)可能影響無菌終產(chǎn)品質(zhì)量的無菌操作工藝評(píng)價(jià)，因此現(xiàn)行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)主要目的是評(píng)估在既定無菌生產(chǎn)環(huán)境和過程控制條件下生產(chǎn)無菌產(chǎn)品的能力、證明指定的無菌工藝設(shè)計(jì)和變更是否可行、證明無菌工藝過程中的相關(guān)操作是否可行、評(píng)估無菌工藝人員的操作水平、發(fā)現(xiàn)無菌工藝過程中潛在的微生物污染因素、以及對(duì)現(xiàn)行GMP要求的合規(guī)能力。
培養(yǎng)基模擬灌裝應(yīng)盡可能地模擬產(chǎn)品本身所經(jīng)歷的與設(shè)備接觸的表面、容器密封系統(tǒng)、關(guān)鍵環(huán)節(jié)和關(guān)鍵工藝操作的接觸，根據(jù)產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝類型，
無菌生產(chǎn)工藝的模擬灌裝操作步驟，因凍干粉針劑無菌生產(chǎn)工藝是相對(duì)齊全的無菌生產(chǎn)工藝，下面以此為例，簡(jiǎn)介一下培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)的關(guān)注點(diǎn)。
培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)主要應(yīng)關(guān)注以下內(nèi)容但不是全部，生產(chǎn)線的狀態(tài)、試驗(yàn)的頻率、培養(yǎng)基類型、灌裝持續(xù)時(shí)間、灌裝的數(shù)量、容器（西林瓶）體積、生產(chǎn)線速度、灌裝體積、挑戰(zhàn)性試驗(yàn)、培養(yǎng)、結(jié)果與評(píng)級(jí)、清場(chǎng)和清洗、模擬灌裝中的有效期等。
生產(chǎn)線的狀態(tài)和試驗(yàn)的頻率，新生產(chǎn)線確認(rèn)期間每個(gè)班次至少執(zhí)行3次連續(xù)的符合要求的試驗(yàn)；持續(xù)性生產(chǎn)線按照每班次和工藝每年重復(fù)2次；生產(chǎn)線在退役前，進(jìn)行一次無菌灌裝；以下變更情況需要進(jìn)行再驗(yàn)證，生產(chǎn)線發(fā)生重大改變、直接接觸產(chǎn)品的設(shè)備、容器改變、參與生產(chǎn)的主要生產(chǎn)人員改變。
培養(yǎng)基類型應(yīng)基于產(chǎn)品的劑型，選擇的培養(yǎng)基應(yīng)能夠支持較寬泛的微生物，最好能符合內(nèi)部種屬；澄清度應(yīng)以便于輕松的觀察到渾濁為宜、濃度應(yīng)當(dāng)遵循供應(yīng)商建議的濃度、若無菌生產(chǎn)過程中使用了過濾器，培養(yǎng)基應(yīng)能夠通過生產(chǎn)過程同一級(jí)別的過濾器過濾為準(zhǔn)，如需稀釋過濾，培養(yǎng)基濃度應(yīng)提供微生物生長能力驗(yàn)證；同時(shí)培養(yǎng)基料液應(yīng)能滿足全部覆蓋生產(chǎn)設(shè)備。
灌裝持續(xù)時(shí)間對(duì)于初始性驗(yàn)證，培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)應(yīng)安排在一周內(nèi)的不同時(shí)間進(jìn)行；對(duì)于再驗(yàn)證，可選擇在一周結(jié)束或其它最差條件下進(jìn)行；灌封時(shí)間要涵蓋實(shí)際生產(chǎn)班次；持續(xù)時(shí)間應(yīng)根據(jù)設(shè)置操作和干預(yù)活動(dòng)所需時(shí)間，以及實(shí)際無菌操作時(shí)間來確定；大批量模擬灌裝時(shí)，可使用一些空白樣品（空的或灌水）以維持模擬實(shí)驗(yàn)的動(dòng)態(tài)環(huán)境；人工灌裝或密封操作的持續(xù)時(shí)間應(yīng)不短于實(shí)際生產(chǎn)工藝整個(gè)流程；持續(xù)試驗(yàn)應(yīng)涵蓋凍干工藝中，模擬未密封的容器置于部分抽真空的腔體，注意避免導(dǎo)致培養(yǎng)基沸騰、冷凍或凍干步驟，確保培養(yǎng)基保持在好氧的狀態(tài)以降低微生物的抑制性。
灌裝的數(shù)量的影響因素有實(shí)際批量、干預(yù)操作的類型、數(shù)量、時(shí)間、開放/隔離廠房的類型，應(yīng)當(dāng)足以模擬商業(yè)化生產(chǎn)條件并評(píng)估商業(yè)化批次污染的可能性，小批次應(yīng)當(dāng)至少等于產(chǎn)品數(shù)量，指南未對(duì)最大批次（≥5000支）做出規(guī)定，通常可接受的起點(diǎn)是5000至10000支。
容器（西林瓶）體積應(yīng)當(dāng)考慮灌裝容器的極端尺寸（最大容器和最小容器），最初的試驗(yàn)中，可以選用二次最大容器，第三次選用最小容器。最大容器（通常由于灌裝量較大而導(dǎo)致最慢的灌裝速度），通常開口較大，所以環(huán)境中微生物侵入的潛在風(fēng)險(xiǎn)較大；最小容器（通常由于灌裝量較小而導(dǎo)致最快的灌裝速度），體現(xiàn)了最大的操作難度；小的容器容易破碎，穩(wěn)定性較差，在設(shè)備中更容易破裂和堵塞；日常的評(píng)估中，其他尺寸的容器也應(yīng)包括在驗(yàn)證計(jì)劃中；不能使用琥珀色的瓶子，而應(yīng)使用透明瓶子，以便可以目視檢查到微生物的生長。
生產(chǎn)線速度應(yīng)包括實(shí)際生產(chǎn)過程的灌裝速度范圍，灌裝生產(chǎn)線的首次驗(yàn)證中，一次可以選用最低速度，另外兩次可以選用最高速度；正常的培養(yǎng)基模擬灌裝應(yīng)包含了最大和最小的生產(chǎn)速度。
灌裝體積不需要與現(xiàn)實(shí)中常規(guī)裝量一致；但應(yīng)有足夠的灌裝量，可以充分接觸到容器的密封件的表面，并且足以目視檢測(cè)到微生物的培養(yǎng)后的生長情況。
挑戰(zhàn)性試驗(yàn)基于日常生產(chǎn)的干擾，如工作班次輪換、監(jiān)測(cè)活動(dòng)、灌裝線裝配、稱量調(diào)節(jié)、加膠塞、處理倒瓶、取樣、環(huán)境監(jiān)測(cè)等日常干擾；設(shè)備故障、灌裝線堵塞、膠塞堵塞、軌道調(diào)節(jié)、拆卸/替換破損的部件等非日常干擾。
培養(yǎng)時(shí)容器必須倒置或旋轉(zhuǎn)確保所有表面，包括容器內(nèi)表面，完全接觸培養(yǎng)基；對(duì)灌有培養(yǎng)基的容器進(jìn)行培養(yǎng)后目視檢查其微生物的生長；應(yīng)經(jīng)過批準(zhǔn)的規(guī)程檢查受污染安瓿的完整性以了解是否有容器或密封件損壞的證據(jù)；目檢應(yīng)該由有資質(zhì)的人員進(jìn)行
結(jié)果范圍應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)要求；結(jié)果評(píng)價(jià)對(duì)可確定污染來源時(shí)，不管是否超出了警戒線或行動(dòng)限，都應(yīng)該將所有收到的污染的微生物至少標(biāo)識(shí)至屬，最好標(biāo)識(shí)至種；對(duì)于所有試驗(yàn)規(guī)模，微生物污染的間歇性事故可能暗示存在有應(yīng)當(dāng)進(jìn)行調(diào)查的低級(jí)別污染。對(duì)嚴(yán)重的失效的調(diào)查應(yīng)該包括對(duì)自從上一次成功的培養(yǎng)基灌裝以來生產(chǎn)的批次的無菌保證影響。
清場(chǎng)和清洗應(yīng)當(dāng)在培養(yǎng)基灌裝結(jié)束后采取妥善措施保證培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證不會(huì)對(duì)后續(xù)的生產(chǎn)帶入污染的風(fēng)險(xiǎn)；培養(yǎng)基有合適的處理方法。
培養(yǎng)基灌裝實(shí)施中效期應(yīng)關(guān)注灌裝或分裝設(shè)備、部件、儲(chǔ)罐、無菌物料、藥液或藥粉在實(shí)際灌裝前能夠放置的最長時(shí)間，采用最長允許儲(chǔ)存時(shí)間的灌裝設(shè)備、灌裝部件、儲(chǔ)罐、無菌物料參與培養(yǎng)基灌裝；采用無菌過濾后存放在儲(chǔ)罐內(nèi)的培養(yǎng)基到實(shí)際生產(chǎn)時(shí)產(chǎn)品的最大儲(chǔ)存時(shí)間后再灌裝。
培養(yǎng)基模擬灌裝驗(yàn)證僅僅是無菌工藝系統(tǒng)在某一個(gè)時(shí)間點(diǎn)的表現(xiàn)，包括環(huán)境、設(shè)備、程序和人員，并不能保證不同時(shí)間段內(nèi)也可以表現(xiàn)出同樣的微生物保證水平，因此為保障無菌產(chǎn)品生產(chǎn)，通過控制和驗(yàn)證所有的相關(guān)工藝，例如環(huán)境監(jiān)測(cè)、人員確認(rèn)和清潔滅菌驗(yàn)證等，才有可能維持無菌工藝的水平，所以單獨(dú)驗(yàn)證相關(guān)的的清潔和滅菌工藝對(duì)保障無菌工藝生產(chǎn)的中產(chǎn)品質(zhì)量也非常重要。
作者：殷志勇 來源：蒲公英
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